Как правильно берут анализ ПЦР у мужчин

В настоящее время для диагностики различных заболеваний создано огромное количество методов. Все они имеют свои как положительные, так и отрицательные стороны. Некоторые из них хорошо подходят для определения одних маркеров или микроорганизмов, в то же время их бесполезно проводить при диагностике других заболеваний. В силу этого была создана одна методика, которая имеет довольно высокую чувствительность ко многим возбудителям и к различным молекулам. Для такой точной диагностики используется полимеразная цепная реакция.

Данную реакцию можно проводить всем без исключения людям. Для проведения этой реакции необходим биологический материал для исследования. Мужские анализы:

• кровь;
• мужской мазок слюны;
• мужской мазок спермы.

У женщин же для исследования чаще всего забирают, помимо крови и слюны, выделения из половых путей. И у тех, и у других для исследования можно использовать специальные мазки-слепки с поверхности слизистых оболочек различных органов.

Как берут анализ ПЦР у мужчин: особенности методики

Конечным результатом, получаемым в результате этой процедуры, являются определенные участки ДНК. Для того чтобы их получить, необходим определенный минимальный набор компонентов:

1. Исследуемый материал или мазок на ПЦР. Как было сказано выше, для проведения полимеразной цепной реакции необходимо наличие биологического материала или мазка у мужчин, в котором будут содержаться участки ДНК нужного нам возбудителя. Поэтому и используются для исследования мазки и соскобы, кровь (чаще всего используется венозная). Немного реже для исследования берут содержимое различных гнойников или новообразований.
2. Праймеры. Под праймерами понимают определенные точки (стартовые и конечные), которые необходимы для синтеза нужной ДНК в определенных условиях. Для исследования обычно берут 2 праймера, действие которых — достраивание нуклеотидов к цепям.
3. ДНК-полимераза. Этот фермент является решающим в проведении ПЦР. Его действие направлено на образование необходимой для исследования и уточнения цепи ДНК. Фермент работает в определенных условиях (крайне важным и необходимым является то, что он должен быть устойчив к воздействию высоких температур, из-за чего его получают от бактерий, активных только при такой окружающей среде).
4. Ионы магния. Они нужны для нормальной активности фермента, т.е. они выступают в роли катализатора химической реакции синтеза ДНК на полученных участках.
5. Среда, в которой будут проходить необходимые реакции. Чаще всего используется буферный раствор с определенной плотностью, кислотностью и ионным составом.
6. Некоторые физические факторы, такие как: давление, температура раствора и окружающей среды, влажность.

Как проходит реакция

Под действием практически всех вышеперечисленных компонентов реакции из биологического материала (мужской анализ) выделяются интересующие нас компоненты ДНК (если таковые имеются). При их наличии реакция продолжается; если же их нет, результат реакции считается отрицательным. Если в биологическом материале присутствует ДНК микроорганизма, начинается реакция амплификации. Как известно, нить ДНК состоит из двух цепей, идущих параллельно друг другу.

Во время реакции амплификации происходит разделение данных цепей на 2 параллельно идущие цепочки нуклеотидов.

На каждую из них садится праймер, основная цель которого под действием имеющейся ДНК-полимеразы образовать еще одну, идентичную той, что была в растворе сначала, нить ДНК. Таких нитей, синтезируемых в реакции, может образовываться крайне много; единственное же условие их образования — соответствие определенным условиям.

Условно протекание ПЦР-реакции можно разделить на несколько периодов. В первом периоде денатурации происходит разделение ДНК под действием высокой температуры (чаще всего выше 95 градусов). После того как цепи ДНК станут одноцепочечными, начинается вторая стадия — стадия отжига. Суть данной стадии заключается в понижении температуры среды для того, чтобы праймеры могли присоединиться к нитям ДНК и начать синтез. Чаще всего эта стадия занимает не более 30 секунд, хотя доказано, что за это время успевает синтезироваться довольно большое количество нуклеотидов.

На третьей стадии, элонгации, происходит полная достройка нужных компонентов каждой из цепей. В конце реакции наступает фаза плато, которая обуславливается снижением скорости синтеза всех цепей, достройкой всех одно цепочечных фрагментов. Время ее наступления, а также длительность фазы элонгации обусловлены количеством имеющихся реагентов.

Для чего же проводится эта реакция

Областей, в которых чаще всего используют данную реакцию, довольно много. Она получила свое распространение в таких сферах, как:

• криминалистика (установление наличия следов преступления и доказательство вины преступника, взяв мужской анализ ПЦР или женский);
• генетика (проведение тестов на отцовство, исследование и установление родственных связей);
• сфера инфекционных заболеваний (выявление в исследуемом материале частиц микроорганизмов либо продуктов их жизнедеятельности и активности);
• персонализационная медицина (позволяет выявить наличие у человека непереносимости различных лекарств непосредственно еще до их применения и частично исследовать чувствительность организма человека и содержащихся у него бактерий к действию тех или иных антибиотиков);
• научная деятельность (становится возможным исследование роста различных образований в условиях invitro, что в дальнейшем способствует уточнению различных данных относительно роста и функциональной способности опухолей).

Когда используют этот метод

Уникальность реакции ПЦР состоит в том, что прямых непосредственных противопоказаний к ее проведению нет. Сама же реакция проводится в таких случаях:

1. Отрицательные или неправильные результаты, полученные при исследовании другими методами. Многие реакции не могут дать полного и развернутого ответа на все интересующие вопросы, а некоторые так и вовсе бесполезны (например, при диагностике атипичных форм малярии, когда возбудитель есть, а клиника неявная или отсутствует). В таком случае и прибегают к проведению ПЦР.
2. Использование для диагностики различных частиц и фрагментов, взятых после антибиотикотерапии. Часто в результате лечения антибиотиками в организме может оставаться некоторое количество микроорганизмов. Так как их мало, то реакции они могут и не вызывать, однако наличие подобного “контейнера” способствует увеличению риска развития рецидивов заболевания. После лечения низко чувствительными методами такие микроорганизмы не всегда удается обнаружить, и тогда на помощь и приходит ПЦР.
3. Замена более дорогостоящих процедур. ПЦР сама по себе является довольно затратной процедурой, однако иногда ее проведения достаточно для уточнения диагноза того или иного заболевания без использования еще более дорогих, а часто и более бесполезных методов.
4. Выявление многих заболеваний, передающихся от партнера к партнеру во время половых сношений. Обуславливается использование ПЦР при диагностике венерических заболеваний тем, что многие возбудители ИППП довольно долгое время себя не проявляют. Исследование мазков-отпечатков со слизистых половых путей и мочеиспускательного канала позволяют выявить их еще до развития клинической картины и начать необходимое лечение как можно раньше.
5. Уточнение онкологической составляющей. У многих пациентов с онкологией не всегда удается определить наличие тех или иных онкомаркеров. ПЦР позволяет выявить наличие либо онкомаркеров, либо дефектных клеток, что значительно повышает точность диагностики опухолей.

Анализ на ПЦР является универсальным методом диагностики. Высокая чувствительность и точность данной реакции делают ее использование необходимой при многих заболеваниях и состояниях. Единственным ее минусом может считаться довольно высокая затратность. Поэтому не каждый мужчина по собственному желанию может себе ее позволить. Для наиболее правильных результатов и точной их интерпретации необходимо строго соблюдать все необходимые условия для данной реакции, так как тогда существенно возрастает риск получения неправильных цепей ДНК и как следствие всего — неправильная интерпретация результатов, которые покажет анализ.